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大鼠海馬神經元細胞培養和傳代流程

更新時間:2022-04-22  |  點擊率:1976
  體外培養大鼠海馬神經元細胞細胞周期有限;建議使用與procell配套的專用生長培養基和正確的操作方法進行培養,以保證細胞處于理想培養狀態。procell實驗室分離的大鼠海馬神經元細胞采用胰蛋白酶消化、神經元特異性培養基培養、篩選結合化學試劑抑制制備。細胞總數約為5×105個細胞/瓶。
  
  大鼠海馬神經元細胞培養和傳代流程(請嚴格按照無菌操作):
  
  1、從原培養瓶中吸出培養基,用PBS緩沖液潤濕細胞兩次,加入2-3ml025%胰蛋白酶消化細胞(注意消化時間,一般控制在1-2min內);
  
  2、在顯微鏡下觀察消化情況。當細胞邊緣收縮松散貼壁時(不建議消化到細胞漂浮),去除胰蛋白酶,加入6-8ml*培養基,輕輕吹干細胞層,盡量吹散細胞層;
  
  3、將部分細胞懸液轉移至新的培養皿/瓶中,加入適量的*培養基,將細胞懸液打勻,放入培養箱中培養;
  
  4、注意培養基pH值的變化,定期更換溶液(每周2-3次),待細胞密度達到80%后重復1次操作或冷凍保存。
  
  特別注意:如果使用公共實驗室接觸大鼠海馬神經元細胞培養,建議添加雙抗體培養。
  
  1、收到細胞后,請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基。如因特殊情況需要繼續使用原瓶,請在原瓶培養基中額外添加10%血清(原瓶培養基連續使用時間不超過72小時);
  
  2、貼壁細胞在收到當天不要立即消化。請更換細胞溶液,放入培養箱中孵育至次日進行消化和繼代培養。請優先使用直徑6cm的培養皿進行繼代培養;
  
  3、培養瓶壁破裂、漏水,請及時拍照記錄并與實驗室聯系。
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